Javascript ti wa ni alaabo lọwọlọwọ ninu ẹrọ aṣawakiri rẹ.Nigbati JavaScript ba jẹ alaabo, diẹ ninu awọn iṣẹ ti oju opo wẹẹbu yii kii yoo ṣiṣẹ.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * Awọn onkọwe wọnyi ni diẹ ninu awọn oye si iṣẹ yii Dogba. abẹlẹ ilowosi: Hyaluronic acid (HA) jẹ polysaccharide ti o nwaye nipa ti ara ti a lo ninu iṣelọpọ awọn ohun elo dermal fun awọn idi ẹwa.Niwọn bi o ti ni idaji-aye ti ọpọlọpọ awọn ọjọ ni awọn ara eniyan, awọn ohun elo dermal ti o da lori HA ti ni iyipada kemikali lati fa igbesi aye wọn pọ si ninu ara.Iyipada ti o wọpọ julọ ni awọn ohun elo ti o da lori HA ti iṣowo ni lilo 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) gẹgẹbi olutọpa ọna asopọ lati sọ awọn ẹwọn HA.BDDE ti o ku tabi ti ko dahun ni a ka pe kii ṣe majele ni <2 awọn ẹya fun miliọnu (ppm);nitorina, BDDE ti o ku ni kikun dermal ti o kẹhin gbọdọ jẹ iwọn lati rii daju aabo alaisan.Awọn ohun elo ati awọn ọna: Iwadi yii ṣe apejuwe wiwa ati isọdi ti ọja-ọja kan ti iṣesi ọna asopọ agbelebu laarin BDDE ati HA labẹ awọn ipo ipilẹ nipasẹ apapọ chromatography omi ati ibi-iwoye (LC-MS).Awọn abajade: Lẹhin awọn itupalẹ oriṣiriṣi, a rii pe awọn ipo ipilẹ ati iwọn otutu ti o ga julọ ti a lo lati disinfect HA-BDDE hydrogel ṣe igbega iṣelọpọ ti ọja tuntun yii, agbo “propylene glycol-like”.Atupalẹ LC-MS jẹrisi pe ọja nipasẹ-ọja naa ni iwọn monoisotopic kanna bi BDDE, akoko idaduro oriṣiriṣi (tR), ati ipo gbigba UV ti o yatọ (λ=200 nm).Ko dabi BDDE, a ṣe akiyesi ni itupalẹ LC-MS pe labẹ awọn ipo wiwọn kanna, ọja-ọja yii ni oṣuwọn wiwa ti o ga julọ ni 200 nm.Ipari: Awọn abajade wọnyi fihan pe ko si epoxide ninu eto ti agbo tuntun yii.Ifọrọwọrọ naa wa ni sisi lati ṣe ayẹwo eewu ti ọja tuntun yii ti a rii ni iṣelọpọ ti HA-BDDE hydrogel (ha dermal filler) fun awọn idi iṣowo.Awọn ọrọ-ọrọ: hyaluronic acid, HA dermal filler, agbelebu hyaluronic acid, BDDE, LC-MS onínọmbà, BDDE nipasẹ-ọja.
Awọn kikun ti o da lori hyaluronic acid (HA) jẹ wọpọ julọ ati awọn ohun elo dermal olokiki ti a lo fun awọn idi ohun ikunra.1 Filler dermal yii jẹ hydrogel, nigbagbogbo ti o jẹ> 95% omi ati 0.5-3% HA, eyiti o fun wọn ni ọna-igi-gel.2 HA jẹ polysaccharide ati paati akọkọ ti matrix extracellular ti awọn vertebrates.Ọkan ninu awọn eroja.O ni (1,4) -glucuronic acid-β (1,3) -N-acetylglucosamine (GlcNAc) atunwi awọn ẹya disaccharide ti o ni asopọ nipasẹ awọn ifunmọ glycosidic.Ilana disaccharide yii jẹ kanna ni gbogbo awọn ohun alumọni.Ti a ṣe afiwe pẹlu diẹ ninu awọn ohun elo ti o da lori amuaradagba (gẹgẹbi kolagin), ohun-ini yii jẹ ki HA jẹ ohun elo ibaramu ti o ga julọ.Awọn ohun elo wọnyi le ṣe afihan ni pato ti ọna amino acid ti o le jẹ idanimọ nipasẹ eto ajẹsara alaisan.
Nigbati o ba lo bi kikun dermal, aropin akọkọ ti HA jẹ iyipada iyara rẹ laarin awọn tisọ nitori wiwa ti idile kan pato ti awọn enzymu ti a pe ni hyaluronidases.Titi di isisiyi, ọpọlọpọ awọn iyipada kemikali ni ọna HA ti ṣe apejuwe lati mu idaji-aye ti HA ni awọn ara.3 Pupọ julọ awọn iyipada wọnyi ngbiyanju lati dinku iraye si hyaluronidase si awọn polymers polysaccharide nipasẹ ọna asopọ HA awọn ẹwọn.Nitorinaa, nitori dida awọn afara ati awọn ifunmọ covalent intermolecular laarin ọna HA ati oluranlowo ọna asopọ agbelebu, HA hydrogel ti o ni asopọ agbelebu n ṣe agbejade awọn ọja ibajẹ anti-enzyme diẹ sii ju HA adayeba lọ.4-6
Titi di isisiyi, awọn aṣoju ipakokoro kẹmika ti a lo lati ṣe agbejade crosslinked HA pẹlu methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) Ati poly (ethylene glycol) diglycidyl ether.10 ,11 BDDE jẹ aṣoju agbelebu ti o wọpọ julọ lo lọwọlọwọ.Botilẹjẹpe awọn iru awọn hydrogels wọnyi ti jẹri pe o jẹ ailewu fun awọn ewadun, awọn aṣoju ọna asopọ ti a lo jẹ awọn reagents ifaseyin ti o le jẹ cytotoxic ati, ni awọn igba miiran, mutagenic.12 Nitorina, akoonu wọn ti o ku ninu hydrogel ikẹhin gbọdọ jẹ giga.BDDE ni a ka ni ailewu nigbati ifọkansi ti o ku kù kere ju awọn ẹya meji fun miliọnu kan (ppm).4
Awọn ọna pupọ lo wa lati ṣe awari ifọkansi BDDE kekere-kekere, alefa ọna asopọ agbelebu ati ipo fidipo ni HA hydrogels, gẹgẹ bi kiromatogirafi gaasi, kiromatogirafi iyasoto iwọn pọ pẹlu spectrometry pupọ (MS), resonance magnetic iparun (NMR) awọn ọna wiwọn fluorescence, ati Diode orun pọ mọ kiromatogirafi olomi iṣẹ giga (HPLC).13-17 Iwadi yii ṣe apejuwe wiwa ati iyasọtọ ti ọja-ọja kan ni ọna asopọ HA hydrogel ti o kẹhin ti a ṣe nipasẹ iṣesi ti BDDE ati HA labẹ awọn ipo ipilẹ.HPLC ati kiromatogirafi-olomi spectrometry (itupalẹ LC-MS).Niwọn igba ti majele ti ọja-ọja ti BDDE ko jẹ aimọ, a ṣeduro pe iyeye iyoku yẹ ki o pinnu ni ọna ti o jọra si ọna ti a maa n ṣe lori BDDE ni ọja ikẹhin.
Iyọ iṣu soda ti a gba ti HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) ni iwuwo molikula ti ~ 1,368,000 Da (ọna Laurent) 18 ati iki inu ti 2.20 m3 / kg.Fun iṣesi ọna asopọ, BDDE (≥95%) ti ra lati Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Saline buffered Phosphate pẹlu pH 7.4 ni a ra lati Ile-iṣẹ Sigma-Aldrich.Gbogbo awọn olomi, acetonitrile ati omi ti a lo ninu itupalẹ LC-MS ni a ra lati didara ipele HPLC.Formic acid (98%) ti ra bi ite reagent.
Gbogbo awọn adanwo ni a ṣe lori eto Iṣeduro UPLC (Omi, Milford, MA, AMẸRIKA) ati ti sopọ si API 3000 meteta quadrupole mass spectrometer ti o ni ipese pẹlu orisun ionization electrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Iṣọkan ti awọn ọna asopọ HA hydrogels ti o ni asopọ agbelebu bẹrẹ nipasẹ fifi 198 mg ti BDDE kun si 10% (w / w) sodium hyaluronate (NaHA) ojutu ni iwaju 1% alkali (sodium hydroxide, NaOH).Idojukọ BDDE ti o kẹhin ninu adalu ifaseyin jẹ 9.9 mg/mL (0.049 mM).Lẹhinna, adalu ifaseyin ti dapọ daradara ati isokan ati gba ọ laaye lati tẹsiwaju ni 45 ° C fun awọn wakati 4.19 pH ti iṣesi naa jẹ itọju ni ~ 12.
Lẹhinna, a ti fọ adalu ifaseyin pẹlu omi, ati pe HA-BDDE hydrogel ti o kẹhin ti wa ni filtered ati ti fomi po pẹlu ifipamọ PBS lati ṣaṣeyọri ifọkansi HA ti 10 si 25 mg/mL, ati pH ikẹhin ti 7.4.Lati le sterilize ti iṣelọpọ HA hydrogels ti o ni asopọ agbelebu, gbogbo awọn hydrogels wọnyi jẹ autoclaved (120 ° C fun awọn iṣẹju 20).BDDE-HA hydrogel ti a sọ di mimọ ti wa ni ipamọ ni 4°C titi ti itupalẹ.
Lati ṣe itupalẹ BDDE ti o wa ninu ọja HA ti o ni asopọ agbelebu, a ṣe iwọn 240 miligiramu ayẹwo ati fi sinu iho aarin (Microcon®; Merck Millpore, Billerica, MA, USA; iwọn didun 0.5 mL) ati centrifuged ni 10,000 rpm ni iwọn otutu yara. 10 iseju.Apapọ 20 µL ti omi ti o fa silẹ ni a gba ati ṣe atupale.
Lati ṣe itupalẹ boṣewa BDDE (Sigma-Aldrich Co) labẹ awọn ipo ipilẹ (1%, 0.1% ati 0.01% NaOH), ti awọn ipo wọnyi ba pade, ayẹwo omi jẹ 1:10, 1:100, tabi to 1: 1,000,000 Ti o ba jẹ dandan, lo MilliQ omi ti a ti sọ diionized fun itupalẹ.
Fun awọn ohun elo ibẹrẹ ti a lo ninu ifasilẹ-ọna asopọ agbelebu (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ati 0.049 mM BDDE), 1 milimita ti ayẹwo kọọkan ti a pese sile lati awọn ohun elo wọnyi ni a ṣe ayẹwo nipa lilo awọn ipo iṣiro kanna.
Lati pinnu pato ti awọn oke ti o han ninu maapu ion, 10 µL ti 100 ppb BDDE ojutu boṣewa (Sigma-Aldrich Co) ni a ṣafikun si apẹẹrẹ 20µL.Ni ọran yii, ifọkansi ikẹhin ti boṣewa ni ayẹwo kọọkan jẹ 37 ppb.
Ni akọkọ, mura ojutu ọja iṣura BDDE kan pẹlu ifọkansi ti 11,000 mg/L (11,000 ppm) nipa diluting 10 μL ti boṣewa BDDE (Sigma-Aldrich Co) pẹlu omi 990 μL MilliQ (iwuwo 1.1 g/mL).Lo ojutu yii lati mura ojutu BDDE 110 µg/L (110 ppb) gẹgẹbi ilọpo idiwọn agbedemeji.Lẹhinna, lo diluent agbedemeji BDDE agbedemeji (110 ppb) lati ṣeto ọna kika boṣewa nipa pipọ diluent agbedemeji ni ọpọlọpọ igba lati ṣaṣeyọri ifọkansi ti o fẹ ti 75, 50, 25, 10, ati 1 ppb.Gẹgẹbi a ṣe han ni olusin 1, a rii pe igbẹ boṣewa BDDE lati 1.1 si 110 ppb ni laini to dara (R2> 0.99).Awọn boṣewa ti tẹ ti a tun ni mẹrin ominira adanwo.
Ṣe nọmba 1 BDDE boṣewa isọdiwọn ti o gba nipasẹ itupalẹ LC-MS, ninu eyiti a ṣe akiyesi ibamu to dara (R2> 0.99).
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography olomi ati spectrometry pupọ.
Lati le ṣe idanimọ ati ṣe iwọn awọn iṣedede BDDE ti o wa ni ọna asopọ agbelebu HA ati awọn iṣedede BDDE ni ojutu ipilẹ, a lo itupalẹ LC-MS.
Iyapa chromatographic ti waye lori iwe LUNA 2.5 µm C18 (2) -HST (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) ati pe a tọju ni iwọn otutu yara (25°C) lakoko itupalẹ.Ipele alagbeka jẹ acetonitrile (iyọ A) ati omi (iyọ B) ti o ni 0.1% formic acid.Awọn mobile alakoso ti wa ni eluted nipa gradient elution.Awọn gradient jẹ bi wọnyi: 0 iṣẹju, 2% A;1 iseju, 2% A;iṣẹju 6, 98% A;iṣẹju 7, 98% A;7.1 iṣẹju, 2% A;Awọn iṣẹju 10, 2% A. Akoko ṣiṣe jẹ iṣẹju mẹwa 10 ati iwọn abẹrẹ jẹ 20 µL.Akoko idaduro ti BDDE jẹ nipa awọn iṣẹju 3.48 (ti o wa lati 3.43 si 4.14 iṣẹju ti o da lori awọn adanwo).Ipele alagbeka ti fa soke ni iwọn sisan ti 0.25 mL/min fun itupalẹ LC-MS.
Fun itupalẹ BDDE ati iṣiro nipasẹ MS, eto UPLC (Omi) ni idapo pẹlu API 3000 meteta quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) ti o ni ipese pẹlu orisun ionization electrospray, ati pe a ṣe itupalẹ naa ni ipo ion rere (ESI +).
Gẹgẹbi iṣiro ion fragment ti a ṣe lori BDDE, ajẹku pẹlu kikankikan ti o ga julọ ni a pinnu lati jẹ ajẹkù ti o baamu si 129.1 Da (Nọmba 6).Nitorina, ni ipo ibojuwo pupọ-ion (MIM) fun titobi, iyipada pupọ (ipin-si-agbara ratio [m/z]) ti BDDE jẹ 203.3 / 129.1 Da.O tun nlo ipo ọlọjẹ kikun (FS) ati ipo ọlọjẹ ion ọja (PIS) fun itupalẹ LC-MS.
Lati le rii daju pato ti ọna naa, ayẹwo òfo (apakan alagbeka akọkọ) ti ṣe atupale.Ko si ifihan agbara ti a rii ni apẹẹrẹ ofo pẹlu iyipada pupọ ti 203.3 / 129.1 Da.Nipa atunwi ti idanwo naa, awọn abẹrẹ boṣewa 10 ti 55 ppb (ni aarin ti tẹ odiwọn) ni a ṣe atupale, ti o yọrisi iyapa boṣewa ti o ku (RSD) <5% (data ko han).
Akoonu BDDE to ku ni a ṣe iwọn ni oriṣiriṣi oriṣiriṣi mẹjọ BDDE ti o ni asopọ agbelebu-ara-ọna HA hydrogels, ti o baamu si awọn adanwo ominira mẹrin.Gẹgẹbi a ti ṣalaye ninu apakan “Awọn ohun elo ati Awọn ọna”, iwọn-iwọn jẹ iṣiro nipasẹ iye apapọ ti iṣipopada ipadasẹhin ti dilution boṣewa BDDE, eyiti o ni ibamu si tente oke alailẹgbẹ ti a rii ni iyipada pupọ BDDE ti 203.3 / 129.1 Da, pẹlu idaduro kan. akoko ti 3.43 to 4,14 iṣẹju Ko nduro.Olusin 2 fihan apẹẹrẹ chromatogram ti boṣewa itọkasi 10 ppb BDDE.Tabili 1 ṣe akopọ akoonu BDDE iyokù ti awọn hydrogels oriṣiriṣi mẹjọ.Iwọn iye jẹ 1 si 2.46 ppb.Nitorinaa, ifọkansi BDDE iyokù ninu apẹẹrẹ jẹ itẹwọgba fun lilo eniyan (<2 ppm).
Olusin 2 Ion chromatogram ti 10 ppb BDDE boṣewa itọkasi (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) iyipada ti a gba nipasẹ LC-MS igbekale ti 203.30/129.10 Da (ni rere MRM mode).
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring;MS, ọpọ;m/z, ibi-si-agbara ipin.
Akiyesi: Awọn ayẹwo 1-8 jẹ autoclaved BDDE ti o ni asopọ agbelebu HA hydrogels.Iye to ku ti BDDE ninu hydrogel ati tente oke ti akoko idaduro BDDE tun jẹ ijabọ.Nikẹhin, aye ti awọn oke tuntun pẹlu awọn akoko idaduro oriṣiriṣi tun jẹ ijabọ.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;MRM, ọpọ lenu monitoring;tR, akoko idaduro;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;RRT, akoko idaduro ojulumo.
Iyalenu, itupalẹ ti chromatogram LC-MS ion chromatogram fihan pe ti o da lori gbogbo awọn ayẹwo awọn ayẹwo HA hydrogel ti o ni asopọ autoclaved ti a ti ṣe atupale, afikun tente oke wa ni akoko idaduro kukuru ti 2.73 si awọn iṣẹju 3.29.Fun apẹẹrẹ, Nọmba 3 fihan chromatogram ion ti apẹẹrẹ HA ti o ni asopọ agbelebu, nibiti afikun afikun ti o han ni akoko idaduro ti o yatọ ti o to awọn iṣẹju 2.71.Akoko idaduro ojulumo ti a ṣe akiyesi (RRT) laarin oke ti a ṣe akiyesi tuntun ati tente oke lati BDDE ni a rii pe o jẹ 0.79 (Table 1).Niwọn bi a ti mọ pe tente oke tuntun ti a ṣakiyesi kere si ni idaduro ni iwe C18 ti a lo ninu itupalẹ LC-MS, tente oke tuntun le ṣe deede si agbopọ pola diẹ sii ju BDDE.
Ṣe nọmba 3 Ion chromatogram ti ọna asopọ agbelebu HA hydrogel ayẹwo ti a gba nipasẹ LC-MS (iyipada ibi-ipamọ MRM 203.3 / 129.0 Da).
Awọn kukuru: HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring;RRT, akoko idaduro ibatan;tR, akoko idaduro.
Lati le ṣe akoso iṣeeṣe pe awọn oke giga tuntun ti a ṣe akiyesi le jẹ awọn idoti ni akọkọ ti o wa ninu awọn ohun elo aise ti a lo, awọn ohun elo aise wọnyi tun ṣe atupale ni lilo ọna itupalẹ LC-MS kanna.Awọn ohun elo ibẹrẹ ti a ṣe atupale pẹlu omi, 2% NaHA ninu omi, 1% NaOH ninu omi, ati BDDE ni ifọkansi kanna ti a lo ninu iṣesi ọna asopọ agbelebu.Chromatogram ion ti ohun elo ibẹrẹ ti a lo ko ṣe afihan eyikeyi agbo-ara tabi tente oke, ati pe akoko idaduro rẹ ni ibamu si oke tuntun ti a ṣe akiyesi.Otitọ yii sọ ero naa kuro pe kii ṣe ohun elo ibẹrẹ nikan le ni eyikeyi awọn agbo ogun tabi awọn nkan ti o le dabaru pẹlu ilana itupalẹ, ṣugbọn ko si ami ti ibajẹ agbelebu ti o ṣeeṣe pẹlu awọn ọja yàrá miiran.Awọn iye ifọkansi ti o gba lẹhin itupalẹ LC-MS ti BDDE ati awọn oke tuntun ni a fihan ni Tabili 2 (awọn ayẹwo 1-4) ati chromatogram ion ni Nọmba 4.
Akiyesi: Awọn ayẹwo 1-4 ni ibamu si awọn ohun elo aise ti a lo lati ṣe agbejade BDDE ti o ni asopọ agbelebu autoclaved HA hydrogels.Awọn wọnyi ni awọn ayẹwo won ko autoclaved.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring.
Nọmba 4 ni ibamu si chromatogram LC-MS ti apẹẹrẹ ti awọn ohun elo aise ti a lo ninu iṣesi ọna asopọ agbelebu ti HA ati BDDE.
Akiyesi: Gbogbo iwọnyi ni a ṣe iwọn ni ifọkansi kanna ati ipin ti a lo lati ṣe iṣe iṣe ọna asopọ agbelebu.Awọn nọmba fun awọn ohun elo aise ti a ṣe atupale nipasẹ chromatogram ni ibamu si: (1) omi, (2) 2% ojutu olomi HA, (3) 1% ojutu olomi NaOH.Ayẹwo LC-MS ni a ṣe fun iyipada pupọ ti 203.30/129.10 Da (ni ipo MRM rere).
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring.
Awọn ipo ti o yori si idasile ti awọn oke titun ni a ṣe iwadi.Lati le ṣe iwadi bii awọn ipo ifasẹyin ti a lo lati ṣe agbejade ọna asopọ HA hydrogel ni ipa lori ifaseyin ti oluranlowo ọna asopọ agbelebu BDDE, ti o yori si dida awọn oke tuntun (awọn ọja ti o ṣeeṣe), awọn iwọn oriṣiriṣi ni a ṣe.Ninu awọn ipinnu wọnyi, a ṣe iwadi ati itupalẹ BDDE crosslinker ti o kẹhin, eyiti a ṣe itọju pẹlu awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti NaOH (0%, 1%, 0.1%, ati 0.01%) ni alabọde olomi, atẹle tabi laisi autoclaving.Ilana kokoro arun lati ṣe simulate awọn ipo kanna jẹ kanna bi ọna ti a lo lati ṣe agbekọja HA hydrogel ti o ni asopọ agbelebu.Gẹgẹbi a ti ṣalaye ninu apakan “Awọn ohun elo ati Awọn ọna”, iyipada pupọ ti apẹẹrẹ jẹ itupalẹ nipasẹ LC-MS si 203.30 / 129.10 Da.BDDE ati ifọkansi ti tente oke tuntun ti wa ni iṣiro, ati awọn abajade ti han ni Tabili 3. Ko si awọn ipele giga tuntun ti a rii ninu awọn apẹẹrẹ ti a ko ṣe adaṣe, laibikita wiwa NaOH ninu ojutu (awọn apẹẹrẹ 1-4, Tablet). 3).Fun awọn ayẹwo autoclaved, awọn ipele titun ni a rii nikan ni iwaju NaOH ni ojutu, ati iṣeto ti tente oke dabi pe o da lori ifọkansi NaOH ni ojutu (awọn ayẹwo 5-8, Table 3) (RRT = 0.79).Nọmba 5 fihan apẹẹrẹ ti chromatogram ion kan, ti o nfihan awọn ayẹwo autoclaved meji ni wiwa tabi isansa ti NAOH.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring.
Akiyesi: chromatogram oke: A ṣe itọju ayẹwo pẹlu 0.1% NaOH ojutu olomi ati autoclaved (120 ° C fun awọn iṣẹju 20).Kromatogram isalẹ: Ayẹwo naa ko ṣe itọju pẹlu NaOH, ṣugbọn autoclaved labẹ awọn ipo kanna.Iyipada pupọ ti 203.30 / 129.10 Da (ni ipo MRM rere) jẹ atupale nipasẹ LC-MS.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring.
Ninu gbogbo awọn ayẹwo autoclaved, pẹlu tabi laisi NaOH, ifọkansi BDDE dinku pupọ (to awọn akoko 16.6) (awọn ayẹwo 5-8, Table 2).Idinku ninu ifọkansi BDDE le jẹ nitori otitọ pe ni awọn iwọn otutu ti o ga, omi le ṣiṣẹ bi ipilẹ (nucleophile) lati ṣii oruka epoxide ti BDDE lati ṣe akojọpọ 1,2-diol.Didara monoisotopic ti yellow yii yatọ si ti BDDE ati nitori naa kii yoo kan.LC-MS-ri a ibi-naficula ti 203.30/129.10 Da.
Nikẹhin, awọn idanwo wọnyi fihan pe iran ti awọn oke giga tuntun da lori wiwa BDDE, NAOH, ati ilana adaṣe, ṣugbọn ko ni nkankan lati ṣe pẹlu HA.
Oke tuntun ti a rii ni akoko idaduro ti isunmọ awọn iṣẹju 2.71 lẹhinna ni ijuwe nipasẹ LC-MS.Fun idi eyi, BDDE (9.9 miligiramu/mL) jẹ idawọle ninu ojutu olomi 1% NaOH ati autoclaved.Ninu Tabili 4, awọn abuda ti tente oke tuntun ni a ṣe afiwe pẹlu tente itọkasi BDDE ti a mọ (akoko idaduro isunmọ awọn iṣẹju 3.47).Da lori igbekale ion fragmentation ti awọn oke meji, o le pari pe tente oke pẹlu akoko idaduro ti awọn iṣẹju 2.72 fihan awọn ajẹkù kanna bi tente oke BDDE, ṣugbọn pẹlu awọn kikankikan oriṣiriṣi (Nọmba 6).Fun tente oke ti o baamu si akoko idaduro (PIS) ti awọn iṣẹju 2.72, a ṣe akiyesi tente ti o nipọn diẹ sii lẹhin pipin ni ibi-nla ti 147 Da.Ni ifọkansi BDDE (9.9 mg / mL) ti a lo ninu ipinnu yii, awọn ọna gbigba oriṣiriṣi (UV, λ = 200 nm) ni irisi ultraviolet ni a tun ṣe akiyesi lẹhin iyapa chromatographic (Nọmba 7).Oke pẹlu akoko idaduro ti awọn iṣẹju 2.71 ṣi han ni 200 nm, lakoko ti oke BDDE ko le ṣe akiyesi ni chromatogram labẹ awọn ipo kanna.
Tabili 4 Awọn abajade abuda ti tente oke tuntun pẹlu akoko idaduro to bii awọn iṣẹju 2.71 ati tente oke BDDE pẹlu akoko idaduro ti awọn iṣẹju 3.47
Akiyesi: Lati gba awọn abajade wọnyi, LC-MS ati awọn itupalẹ HPLC (MRM ati PIS) ni a ṣe lori awọn oke meji.Fun itupalẹ HPLC, wiwa UV pẹlu igbi gigun ti 200 nm ni a lo.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, chromatography omi ti o ga julọ;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring;m/z, ibi-si-agbara ratio;PIS, ọja Ion ọlọjẹ;ina ultraviolet, ina ultraviolet.
Akiyesi: Awọn ajẹkù ti o pọ julọ ni a gba nipasẹ itupalẹ LC-MS (PIS).chromatogram ti o ga: titobi pupọ ti awọn ajẹku ayẹwo boṣewa BDDE.Kromatogram isalẹ: Iwọn titobi pupọ ti tente oke tuntun ti a rii (RRT ni nkan ṣe pẹlu tente oke BDDE jẹ 0.79).BDDE ti ni ilọsiwaju ni 1% NaOH ojutu ati autoclaved.
Awọn kukuru: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ti omi ati awọn iwoye ti o pọju;MRM, ọpọ lenu monitoring;PIS, ọlọjẹ ion ọja;RRT, akoko idaduro ojulumo.
Ṣe nọmba 7 Ion chromatogram ti 203.30 Da precursor ion, ati (A) tente oke tuntun pẹlu akoko idaduro ti awọn iṣẹju 2.71 ati (B) wiwa UV ti itọkasi boṣewa BDDE ni awọn iṣẹju 3.46 ni 200 nm.
Ninu gbogbo awọn ọna asopọ HA hydrogels ti a ṣe agbejade, a ṣe akiyesi pe ifọkansi BDDE iyokù lẹhin iwọn LC-MS jẹ <2 ppm, ṣugbọn tente oke aimọ tuntun han ninu itupalẹ.Oke tuntun yii ko baramu ọja boṣewa BDDE.Ọja boṣewa BDDE tun ti ṣe iyipada didara kanna (iyipada MRM 203.30/129.10 Da) ni ipo MRM rere.Ni gbogbogbo, awọn ọna itupalẹ miiran gẹgẹbi kiromatografi ni a lo bi awọn idanwo opin lati ṣe awari BDDE ninu awọn hydrogels, ṣugbọn opin wiwa ti o pọju (LOD) kere diẹ sii ju 2 ppm.Ni apa keji, titi di isisiyi, NMR ati MS ti lo lati ṣe afihan iwọn ti ọna asopọ-agbelebu ati / tabi iyipada ti HA ni awọn abọ suga suga ti awọn ọja HA ti o ni asopọ agbelebu.Idi ti awọn ilana wọnyi ko jẹ lati ṣe iwọn wiwa BDDE iyokù ni iru awọn ifọkansi kekere bi a ṣe ṣapejuwe ninu nkan yii (LOD ti ọna LC-MS wa = 10 ppb).
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-01-2021